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稀释-激发质谱法在生物过程开发中加速代谢表型鉴定中的应用

稀释-激发质谱法在生物过程开发中加速代谢表型鉴定中的应用

  • 分类:植物表型资讯
  • 作者:PhenoTrait
  • 来源:本站
  • 发布时间:2021-05-13 06:10
  • 访问量:

【概要描述】在这项研究中,我们开发和评估了六种氨基酸定量方法,它们是基于两个强阳离子交换柱和稀释-激发法,并与三重四极或四极飞行时间质谱联用。

稀释-激发质谱法在生物过程开发中加速代谢表型鉴定中的应用

【概要描述】在这项研究中,我们开发和评估了六种氨基酸定量方法,它们是基于两个强阳离子交换柱和稀释-激发法,并与三重四极或四极飞行时间质谱联用。

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通过微型平台的使用,微生物表型和生物过程开发得到了显著加速,然而在生物分析方面产生了一个瓶颈。虽然微型栽培平台可以监测典型参数,但产品信息有限,分析不全面。使用液相色谱-质谱法可以提供一个全面和定量的见解,但往往受到分析运行时间和通量的限制。在这项研究中,我们开发和评估了六种氨基酸定量方法,它们是基于两个强阳离子交换柱和稀释-激发法,并与三重四极或四极飞行时间质谱联用。

 

三种用IDMS定量19种蛋白原氨基酸的方法的提取离子色谱图

 

利用同位素稀释质谱与13C15N标记的氨基酸校正基质的影响。通过详细的方法验证研究,证实了微生物培养上清液代谢产物谱研究方法的通用性。使用色谱柱的方法显示了约4个数量级的线性范围、足够的响应因子和单个分析物的低定量限(7–443 nM)。

 

CGXII(a–c)和200 mM MOPS缓冲CGXII(d–f)培养基中流动相中有机成分(v / v)变化的误差分析证明了His(a,d),Gly(b,e )和Ala(c,f)。

 

总的来说,所有分析物的相对标准偏差都具有可比性,无缓冲和缓冲介质的相对标准偏差分别<8%和<11%。分析时间为1 min的稀释法和注射法性能相近,但通量提高了35倍。使用从随机诱变获得的生产L-组氨酸的谷氨酸棒状杆菌菌株文库,证明了该性能和适用性,并将其在微型培养平台上进行培养。

 

使用QqQ或QqToF质量分析仪的RSD对DS-FIA,SCX50和SCX150方法的方法精度进行比较

 

来源:

Reiter A, Herbst L, Wiechert W & Oldiges M. Need for speed: evaluation of dilute and shoot-mass spectrometry for accelerated metabolic phenotyping in bioprocess development. Analytical and Bioanalytical Chemistry (2021).https://doi.org/10.1007/s00216-021-03261-3.

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